Se parte de cultivos en Caldo Tripticosa Soja (TSB) incubados 24 horas a 37ºC. Se confirma la suficiencia del número de unidades formadoras de colonia por mililitro, mediante escala McFarland 0,5, para un vol. de 0,5 mL. (concentración: 15 x 10⁷ UFC).

Se extraen las correspondientes diluciones de E. coli; Klebsiella pneumoniae; Proteus mirabilis; Staf. areus y Ps. aeruginosa.

Se mezclan 0,5 de vol. de solución con gérmenes individualizados a tal concentración con 0,5 mL. del preparado COMPLUCAD con inferior riqueza de principios activos de la gama.

Agitación con VORTEX para obtener la actuación de 15 minutos preparado-microorganismos.

Sedimentación con creación de dos capas.

Eliminación de la sobrenadante de menor densidad tras la actuación en este tiempo del preparado.

Del sedimento se toman 0,5 mL. para equipo UROQUIT donde se incuba a 37ºC durante 5 horas.

Recuento en lector para análisis de la reducción de población bacteriana que valoramos en escala logarítmica.

Resiembra al finalizar el ensayo en placas, sobre superficie de TSA donde se verifica presencia (+) o ausencia (-) de crecimiento de microorganismos tratados (37ºC, 48H).

Como control se inoculan 0,1 mL. de la suspensión microbiana en 10 mL. de agua bidestilada y se subcultivan 0,1 mL. de esta en 10 mL. de TSB y se siembra en placa de TSA.

RESULTADOS

• Concentración %: 25 (0,5/0,5 mL.)
• Tiempo contacto: 15 minutos.
• Resultado: Reducción de 7 log. con ausencia de crecimiento.
• Control: Positivo.

Inóculo: K.pneumoniae 15 x 10⁷ UFC en 0,5 mL.

• Concentración %: 25 (0,5/0,5 mL.)
• Tiempo contacto: 15 minutos.
• Resultados: Reducción de 7 log. con ausencia de crecimiento.

Inóculo: Proteus mirabilis 15 x 10⁷ UFC en 0,5 mL.

• Concentración %: 25 (0,5/0,5 mL.)
• Tiempo contacto: 15 minutos.
• Resultado: Reducción de 7 log. con ausencia de crecimiento.
• Control: Positivo.

Inóculo: Staf. aureus 15 x 10⁷ UFC en 0,5 mL.

• Concentración %: 25 (0,5/0,5 mL.)
• Tiempo contacto: 15 minutos.
• Resultado: Reducción de 7 log. con ausencia de crecimiento.
• Control: Positivo.

Inóculo: Pseudomonas aeruginosa 15 x 10⁷ UFC en 0,5 mL.

• Concentración %: 25 (0,5/0,5 mL.)
• Tiempo contacto: 15 minutos.
• Resultado: Reducción de 7 log. con ausencia de crecimiento.
• Control: Positivo.

Siembra en placas conteniendo medio de SABOUREAUD-DEXTROSA de los hongos Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger, y Penicillium sp. a 27ºC durante 72 horas.

Adición en SPOT del preparado COMPLUCAD de inferior riqueza, en extremo de medio cultivo sembrado y cultivado a 27ºC durante 72 horas entre cubre y portaobjetos.

Investigación a las siguientes 72 horas de la viabilidad de agente fúngico, mediante resiembra de nuevo en medio SABOUREAUD-DEXTROSA, incubando a temperatura ambiente 27ºC hasta el día 7º de seguimiento.

• Aspergillus fumigatus: ausencia de crecimiento.
• Aspergillus niger: ausencia de crecimiento.
• Penicillium sp.: ausencia de crecimiento.
• Controles: Crecimiento positivo en los 3 ensayos.

CONCLUSIONES:

En Málaga a nueve de abril de 1.996

Firmado:
Prof. F. Calbo Torrecillas
Catedrático.